1、Elisa的原理
年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）。测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。 其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。 这种有色产物可用肉眼、光学显镜、电子显镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便讯速，特异性强。 ELISA原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牵9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。 elisa kit使用方法（以人il4 elisa kit为例）： 检测原理: 本实验采用双抗体夹心elisa法。抗人il抗体和辣根过氧化物酶标记的亲 和素。生物素与亲和素特异性结合；抗人il，辣根过氧化物酶会使无色 的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在值之间呈正比，可 通过绘制标准曲线出标本中il4的浓度。 试剂盒组成： ×6） 支；） ml/ml） 4．浓缩生物素化抗体（紫盖瓶）（1 支） 5．生物素化抗体稀释液（蓝盖瓶）（1 瓶；ml/ml） 6．浓缩酶结合物（棕盖瓶）（1 支） 7．酶结合物稀释液（紫盖瓶）（1 瓶；ml/ml） 瓶；ml） ml） ．反应终止液（红盖瓶）（1 瓶；ml/6ml） ．封板胶纸（6/3 张） ．产品说明书（1 份） 标本收集: 1. 收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆抗凝剂推荐使用edta。避免使用溶血，高血脂标本。 3. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 ℃电冰箱内，避免反复冻融，月内检测。 5. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建 议做预实验，以确定稀释倍数)。 注意事项: ℃。复溶后的标准品应分装后，将其放在℃贮存。 5次使溶液混匀。 ℃）使用时洗涤液应为室温。 ℃贮存。避免反复冻 融。 5. 不同批的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）。 6. 充分轻混匀对反应结果尤为重要，最好使用量振荡器(使用最低频率)，如无量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 7. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测。 8. 试验中所用的试管和吸头均为一次性使用，严禁在不同的液体之间混用！否则将影响试 验结果。 9. 试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本时， 请按国家生物试验室安全防护条列执行。 检测前准备工作: 分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温。 )。未用完的放回4℃。 、、、、、℃以下电冰箱内保存，保存两个月。已稀释的标准品请废弃。 :)成工作浓度。当日使用。若实验次数过多导致生物素化 抗体量不足，可向我们单独购买生物素化抗体。（须提供抗体批） :) 成工作浓度。当日使用。若实验次数过多导致浓缩酶结合物量不足， 可向我们单独购买浓缩酶结合物。（须提供酶结合物批） 洗涤方法: 秒。洗板5次。 秒后甩尽液体，在厚迭吸水纸上拍干。洗板5次。 操作步骤: 1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。 分钟。 分钟准备生物素化抗体工作液。 4．洗板5次。 分钟。 ) ℃ 放置。 7．洗板5次。 分钟。 9．开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 ．洗板5次。 ．加入显色底物(tmb)ul/孔，避光℃孵箱，避光孵育分钟。 ．加入终止液ul/孔, 混匀后即刻测量od分钟内)。在仪器保存读数结果并印一份纸质结果。 ．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。 建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。 结果判断: 1. 每个标准品和标本的od值应减去空白孔的od值。 2. 手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，od值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的od值可在标准曲线上查出其浓度。 3. 若标本od值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 灵敏度、特异性和重复性: ● 灵敏度：最小可测人il4达7pg/ml。 ● 特异性：不与il－,,,,ifn,tnf及stnfrii等反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均<%。 il4简介： il期。il、 igga、iga和ige。也增强单个核吞噬细胞表达mhcii类抗原，但对炎症性细胞因子（如il 也活化细胞毒性 t细胞，它被认为是典型的由th2细胞产生的细胞因子，对于t,b淋巴细胞的发育以及驱动体液免疫反应和抗体产生都是十分重要的。
2、MR-VP培养基是什么
MRP培养基是用于大肠杆菌的甲基红和P试验。 配方：（g/L） ± ℃ 月示胨 葡萄糖 磷酸氢二钾 原理： 月示胨提供碳氮源、维生素和生长因子；葡萄糖为可发酵的糖类；磷酸氢二钾是缓冲剂；氯化钠维持均衡的渗透压。 甲基红（MR）试验：肠杆菌科的细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸。大肠杆菌分解丙酮 酸，次生的酸类较多，，甲基红呈现红色（阳性）。在产气杆菌的培养液中一部分丙酮酸变为中性的乙酰甲基甲醇，生成的酸类较少，，甲基红呈现桔黄色（阴性）。 乙酰甲基甲醇生成试验（—P试验）：细菌发酵葡萄糖生成丙酮酸，某些细菌可使丙酮酸脱羧形成乙酰甲基甲醇。在碱性溶液中，乙酰甲基甲醇可在空气中氧化成二乙酰（丁二酮）。二乙酰再与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。试验中加入α—萘酚是作催化剂，使反应的颜色加深，提高反应的敏感性。 用法： 称取本品 蒸馏水中,分装试管， ℃高压灭菌 分钟备用。 MRP 培养基，国内的培养基生产商一般都生产，用来做甲基红试验和P试验用的，国内青岛海博，广东环凯等等国内领先的培养基生产商都生产，青岛日水起步尚浅。 缓冲的胨葡萄糖肉汤培养基（MRP培养基）,好像是青岛日水生物技术出的。
3、为什么对于同一种细菌来说,MR试验和VP试验最多只有一种呈阳性
不能说全部细菌都这样，这多见于长干均可的细菌，具肉体·具体与糖的分解过程有关。 mr和vp试验都是验证葡萄糖分解产物的，mr阳性说明产酸，vp说明不产酸。假阳性的原因恐怕和试剂和反应时间有关系。
4、分析化学中VP是什么意思
P是价层电子数，BP是成键电子数，LP是孤对点子数。 血管加压素 再看看别人怎么说的。
5、微生物学检验 PYR试验的原理?
吡咯烷酮 (PYR)酶试验原理：化脓性链球菌产生的吡咯烷酮芳香酯酶能水解吡咯烷酮β萘基酰胺,加入N,N二甲氧基肉桂醛试剂后产生桃红色即为阳性. imvic试验 细菌的生化反应用于鉴别细菌，尤其对形态、革兰染色反应和培养特性相同或相似的细菌更为重要。 吲哚（i）、甲基红（m）、vp（v）、枸橼酸盐利用（c）四种试验常用于鉴定肠道杆菌，合称为imvic试验。例如大肠埃希菌对这四种试验的结果是“”，产气肠杆菌则为“”。 吲哚试验：某些细菌有色氨酸酶，能分解色氨酸形成吲哚；将对二甲基氨基苯甲醛加入细菌蛋白胨水培养液中，吲哚与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛结合，呈红色反应，形成玫瑰吲哚，为吲哚试验阳性。不出现红色则为阴性。 甲基红试验：产气肠杆菌使丙酮酸脱羧后形成中性产物，培养液ph〉。甲基红指示剂呈橘黄色，为甲基红试验阴性，大肠埃希菌分解葡萄糖产生丙酮酸，培养液呈酸性ph〈，指示剂甲基红呈红色，称甲基红试验阳性。 vp试验：大肠埃希菌与产气肠杆菌分解葡萄糖，产酸产气，为区分两菌可采用vp试验及甲基红试验。产气肠杆菌能使丙酮酸脱羧，氧化（在碱性溶液中）生成二乙酰，后者可与含胍基的化合物反应，生成红色化合物，称vp试验阳性；大肠埃希菌分解葡萄糖产生丙酮酸，vp试验阴性。 枸橼酸盐利用试验：能利用枸橼酸盐作为唯一碳源的细菌如产气肠杆菌，分解枸橼酸盐生成碳酸盐，同时分解培养基的铵盐生成氨，使培养基呈碱性是，使指示剂溴麝香草酚蓝（btb）由淡绿转为深蓝，此为枸橼酸盐利用试验阳性。 参考自百科 imvic试验
