1、浊点萃取法的原理，仪器及应用？越详细越好，不要粘贴的
浊点萃取法(cloud point extraction，CPE)〔1〕是近年来出现的一种新兴的液—液萃取技术，它不使用挥发性有机溶剂，不影响环境。它以中性表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础，改变实验参数引发相分离，将疏水性物质与亲水性物质分离。目前该法已成功地应用于金属螯合物、生物大分子的分离与纯化及环境样品的前处理中。 CPE 法除了利用增溶作用外，还利用了表面活性剂另一个重要性质——浊点现象。溶液静置一段时间(或离心)后会形成两个透明的液相：一为表面活性剂相(约占总体积的5％)；另一为水相(胶束浓度等于CMC)。外界条件(如温度)向相反方向变化，两相便消失，再次成为均一溶液。溶解在溶液中的疏水性物质如膜蛋白，与表面活性剂的疏水基团结合，被萃取进表面活性剂相，亲水性物质留在水相，这种利用浊点现象使样品中疏水性物质与亲水性物质分离的萃取方法就是浊点萃取。图1显示了由温度变化引发的这种相分离现象。温度的改变，引起水化层的破坏，增强了表面活性剂的疏水性。 蛋白质分离纯化中的应用： CPE 法可用于分离膜蛋白、酶、动物、植物和细菌的受体，还可以替代一些分离方法如硫酸铵分级法作为纯化蛋白的第一步，与色谱方法联用。另外，CPE 法分离纯化蛋白质已经可以实现大规模操作。Minuth等人成功地进行了胆固醇氧化酶浊点萃取的中试研究。虽然使用离心分离器可以使CPE大规模连续进行，但商品离心分离器用于CPE 的效率和容量仍需进一步研究。而且，他们发现相分离操作受细胞培养时产生的表面活性物质影响较大，体系两相间密度差较小，表面张力较小，含产物的表面活性剂相的流变学行为较复杂，操作较难。表1列出了CPE法近几年来在蛋白质分离纯化中的应用。 (1) CPE法用于分离纯化膜蛋白 膜蛋白(内嵌膜蛋白、外围膜蛋白)硫水性强、难溶于水，抽提内嵌膜蛋白时，既要削弱它与膜脂的硫水性结合，又耍使它保持硫水基在外的天然状态，较难分离纯化。由于表面活性刑具有两亲性，它一直作为腹蛋白理想的增溶剂。增溶时，膜蛋白琉水部分嵌入胶束的硫水核中而与膜脱离，又保持了膜蛋白表面的废水结构。相分离后，膜蛋白与表面活性剂共同析出，与亲水性蛋白质分离。所以，CPE 法在分离纯化膜蛋白方面极有优势。 (2) 与其它分析技术的联用 CPE 可以作为高效液相色谱(HPLC)、流动注射分析(FIA)、毛细管电泳(CE)等仪器分析的样品前处理方法，提高检出灵敏度。表面活性别可以防止样品吸附在玻璃容器上，易于与FIA中的载液及HPLC中的有机流动相或胶束流动相混合，可以直接进样。但是在很多应用中需要除去表面活性剂后再与仪器联用。将萃取物与表面活性剂分离的方法很多。对于CMC＞h左右)。对于CMC 较小的表面活性剂可通过色谱柱分离除去，如凝胶柱、毛纫管柱等，分离出的表面活性剂可以再利用，也可以作焚烧处理。但CPE作为HPLC 的样品前处理方法有两个缺点：第一，常用的表面活性剂在U区域有很强的背景吸收。第二，操作时间较长，从色谱柱上需用几个小时洗脱表面活性剂。表面活性剂的洗脱可能会干扰分析物的测定。
2、癌症尿液检测试剂是什么东西？
癌症尿液检测试剂是一种通过癌症尿液检测试剂对人体尿液中酪氨酸含量的检测，来进行大面积人群的癌症早期筛查。当人体内有癌细胞活动时，细胞的异常增殖引发应激反应，导致体内特异氨基酸代谢异常增高，尿液中酪氨酸的含量远远超过正常人。本试剂可与尿液中酪氨酸发生特异性反应，以此判定被测试者体内癌细胞的活跃程度
3、埃利希试剂的主要成分是什么？其检测重氮化反应的原理是什么？
4二甲氨基苯甲醛，简称埃利希试剂。 用于测定吲哚、粪臭素、尿蓝母、色氨酸、白蛋白、过氧化氢、胂凡钠明、邻氨基苯甲酸、安替比林麦角碱等，还用以区别血清发疹和腥红热。制造染料。用作染料中间体，用作测定尿胆素、吲哚、生物碱等的试剂及色谱分析试剂。
4、如何用癌细胞的细胞分泌外液中提取外泌体
如何用癌细胞的细胞分泌外液中提取外泌体 小胶质细胞(microglia)是神经胶质细胞的一种，相当于脑和脊髓中的巨噬细胞，是中枢神经系统(CNS)中的第一道也是最主要的一道免疫防线。小胶质细胞大约占大脑中的神经胶质细胞的%。小胶质细胞不停地清除着中枢神经系统中的损坏的神经，斑块及感染性物质。无数临床上和神经病理学研究表明激活的小胶质细胞在神经退化类疾病的发病机理中起到十分重要的作用，如帕金森病，多发性硬化和阿兹海默症等。但是过多激活或失控的小胶质细胞会引起神经毒性。他们是促炎因子和氧化应激的重要，如肿瘤坏死因子（TNF），一氧化氮，白介素等有神经毒性的物质
5、酶联免疫诊断试剂盒的底物A和B分别什么作用？
酶联免疫诊断试剂盒（上海科华的试剂盒）的底物A就是显色剂A（含过氧化氢）为供氢体（DHnm’，5，5’Tetramethylbenzidine）是一种脂溶性较强的基团，因此容易进入细胞与细胞器中的HRP反应， 且由于这种高度的脂溶性，使其易形成多聚体，在HRP活性部位产生粗大的、深兰色沉淀物，这使得TMB成为组化实验中的一种很好的发色团。同时反应产物的沉淀，使得HRP的活性部位更加暴露，利于酶氧化反应进行。 TMB的反应产物为深蓝色，利于光镜观察，且反应产物越聚越大，常超出单个细胞器的范围（而DAB则被限制在其内），故TMB反应的检测阈较低。 由于上述优点，目前TMB常用于光镜及超结构水平的HRP及HRPWGA神经投射的研究。需要注意的是：TMB显色液中的A液和B液应在2h内新鲜配制。另外，TMB是一种较强的皮肤刺激剂，并有致癌的潜在可能，故使用时应带手套及在通风条件下操作。 TMB经HRP作用后共产物显蓝色，目视对比鲜明。TMB性质较稳定，可配成溶液试 剂，只需与H2O2溶液混和即成应用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有无致癌性等 优点，因此在ELISA中应用日趋广泛。酶反应用HCL或H2SO4终止后，TMB产物由蓝色呈 黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为nm。 ABTS虽不如OPD和TMB敏感，但空白值极低，也为一些试剂盒所采用。 酶联免疫诊断试剂盒（上海科华的试剂盒）的底物A就是显色剂A（含过氧化氢）为供氢体（DHnm’，5，5’Tetramethylbenzidine）是一种脂溶性较强的基团，因此容易进入细胞与细胞器中的HRP反应， 且由于这种高度的脂溶性，使其易形成多聚体，在HRP活性部位产生粗大的、深兰色沉淀物，这使得TMB成为组化实验中的一种很好的发色团。同时反应产物的沉淀，使得HRP的活性部位更加暴露，利于酶氧化反应进行。 TMB的反应产物为深蓝色，利于光镜观察，且反应产物越聚越大，常超出单个细胞器的范围（而DAB则被限制在其内），故TMB反应的检测阈较低。 由于上述优点，目前TMB常用于光镜及超结构水平的HRP及HRPWGA神经投射的研究。需要注意的是：TMB显色液中的A液和B液应在）AP的底物，常用的为对硝基苯磷酸脂（PNP），其反应物为黄色的对硝基酚，测读波长为，’Tetramethylbenzidine）是一种脂溶性较强的基团，因此容易进入细胞与细胞器中的HRP反应， 且由于这种高度的脂溶性，使其易形成多聚体，在HRP活性部位产生粗大的、深兰色沉淀物，这使得TMB成为组化实验中的一种很好的发色团。 . 与相关酶催化反应有关。酶催化底物形成产物，底物种类可以是一种也可以是多种。底物A和B分别代表了两种反应底物。
6、支原体检测试剂盒的使用方法是什么
支原体检测试剂盒操作步骤： 贴壁细胞： ，接种密度为×。同时，接种正常无支原体感染的同种细胞，作为阴性对照。 ，先吸去培养液，再加入min， ，晾干。 ，加入工作液须覆盖全部被检细胞），～min。 ml灭菌超纯水洗涤三次，直接风干。风干后加入一滴封片液，并以盖玻片覆盖。 。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。 悬浮细胞： ，rpm，5min。 ，再加min。 ，晾干。 ，加入工作液须覆盖全部被检细胞），～min。 次，直接风干。风干后加入一滴封固液，并以盖玻片覆盖。 。用紫外激发光激发，观察细胞周围是否有蓝色荧光小点或串珠状荧光小点。 结果判断（参考）： 阴性：仅见细胞的细胞核呈现黄绿色荧光。 阳性：除细胞外，细胞周围可见大量的大小均一的荧光着色颗粒。
