1、SDS-PAGE测定蛋白质分之量的基本原理是什么?简述一下主要步骤?同志们帮帮忙,我出200分

   原理 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基磺酸钠), SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中,与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在KD到KD之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMr=KbX,式中:Mr为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上得分子量。 实验步骤 , 准备2个干净的锥形瓶. ,两边用力一定要均匀,防止夹坏玻璃板. , 催化剂TEMED要在注胶前再加入,,并隔绝空气 凝胶聚合好的标志是胶与水层之间形成清晰的界面. . 5. 在上槽内加入缓冲液后,拔出样梳。要使锯齿孔内的气泡全部排出,否则会影响加样效果. : (1)取μl标准蛋白溶解液于EP管内,再加入μl 2倍样品缓冲液,上样量为μl。 (μl和3μl。 ,去掉亚稳态聚合。注射器不可过低,以防刺破胶体,也不可过高,. ,接通电源,进行电泳,开始电流恒定在mm时,停止电泳。 :电泳结束后,撬开玻璃板,将凝胶板做好标记后放在大培养皿内,加入染色液,染色1小时左右。 :染色后的凝胶板用蒸馏水漂洗数次,再用脱色液脱色,直到蛋白质区带清晰。剥胶时要小心,保持胶完好无损,染色要充分. 实验结果及分析 ,以标准蛋白质相对分子质量的对数(lgMr)为纵坐标,相对迁移距离为横坐标作图。 相对迁移距离=蛋白质分子迁移距离(cm)/染料迁移距离(cm) 根据样品蛋白质分子的相对迁移距离,从标准曲线上查出其相对分子质量。 sds使不同的蛋白带上相同的电荷 颗粒大小和蛋白式量有关 在page中蛋白和sds复合物的移动速度只和蛋白式量有关 只是记忆中,我们做过这个实验,不过是一年前了(仅供参考) 原理:不同蛋白质分子量不同,跑胶的速度就不一样。可以把不同的蛋白质分离开

2、SDS-PAGE电泳的原理是什么?

   作用原理聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构,具有分子筛效应,它有两种形式,一种是非变性聚丙烯酰胺凝胶,蛋白质在电泳中保持完整的状态,蛋白在其中依三种因素分开:蛋白大小,形状和电荷。 而SDSPAGE仅根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。这个技术首先是年由shapiro建立,他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后,蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小,电荷因素可以忽视。 SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二。三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使绊胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白 SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的蛋白量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。 SDSPAGE一般采用的是不连续缓冲系统,于连续缓冲系统相比,能够有较高的分辨率。 浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCL缓冲液,电级液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后,HCL解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成以稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。 sds聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进sds(十二烷基硫酸钠),sds会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合sds的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此sds多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关,在达到饱和的状态下,。当分子量在kd到kd之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logmw=kbx,式中:mw为分子量,x为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上得分子量。生物帮上面有去看看吧,? ?生物生理学科研进展,植物生理学科研进展,动物生理学科研进展,人体生理学科研进展?。

3、SDS-PAGE检测蛋白质分子量的基本原理

   蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合,-复合物都带上相同密度的负电荷,它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量,因而消除了蛋白质原有的电荷差别,使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量,而与蛋白质所带的电荷无关,在一定条件下,蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。 操作步骤 1、凝胶制备: 用两块电泳玻璃板制成垂直板槽(不能漏胶),. 2、上样: 分别取样品若干ml于离心管中,按/~mA/em),保持电流稳定不变,当溴酚蓝迁移到离分离胶底1~2cm时,即可停止电泳. 3、染色: 电泳完毕后,取出凝胶板,浸入染色液中,在℃. sdspage判定蛋白质的纯度:若该蛋白质是单肽链蛋白质,则电泳得到的只有一条蛋白带(两条色带:一条为溴酚蓝,一条为蛋白带);若得出多条电泳带,则应该用非sds-page进行电泳,得出单一蛋白带则为单一蛋白质 sdspage判定蛋白质的分子量: 定义:r=de/do r为迁移率,de为蛋白质电泳迁移距离,do为溴酚蓝电泳迁移距离 则lgm=abr m为蛋白质分子量,a、b为常熟,a、b可由标准蛋白质(已知分子量的蛋白质)的迁移率算出。 若蛋白质为单肽链蛋白质,则m为其分子量;若蛋白质为多肽链蛋白质,则其分子量为各m之和 你不是自己说了很多了吗。在我的理解,本来蛋白质的分子量就很大,不可能测量得很精确,因为使用的标尺也是一些标准蛋白质制成的marker(ladder)。你所引用的不是就有“大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合,-复合物都带上相同密度的负电荷”吗,1g蛋白质对应一定的负电荷,然后复合物电荷数目不同电泳迁移率不同,跟标准蛋白一比较,就测出蛋白质分子量了

4、SDS-PAGE中SDS的生物学功能是什么

   SDS可以中和蛋白质表面电荷,并破坏蛋白质构象,使其成为线性。这样分离时只和蛋白质的分子量有关,而与构象等无关。 聚丙烯酰胺凝胶电泳作用:用于分离蛋白质和寡核苷酸。 作用原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚丙烯酰胺凝胶及sds聚丙烯酰胺凝胶(sdspage);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。 而sdspage仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由shapiro于年建立,他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后,蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小(可以忽略电荷因素)。 sds是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和sds后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和sds结合成蛋白 sds胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。 sdspage一般采用的是不连续缓冲系统,与连续缓冲系统相比,能够有较高的分辨率。 浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选tris/hcl缓冲液,电极液选tris/甘氨酸。电泳开始后,hcl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成以稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。 此鉴定方法中,蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量,而与所带电荷和分子形状无关。 丙烯酰胺凝胶电泳简称为page(polyacrylamide gel electrophoresis) 聚丙烯酰氨凝胶电泳 ,是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵(ap)为催化剂,以四甲基乙二胺(temed)为加速剂。在聚合过程中,temed催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰胺单体聚合,同时甲叉双丙烯酰胺与丙烯酰胺链间产生甲叉键交联,从而形成三维网状结构。 page根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续系统两大类,连续系统电泳体系中缓冲液ph值及凝胶浓度相同,带电颗粒在电场作用下,主要靠电荷和分子筛效应。不连续系统中由于缓冲液离子成分,ph,凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应,分子筛效应,还具有浓缩效应,因而其分离条带清晰度及分辨率均较前者佳。不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。浓缩胶是由ap催化聚合而成的大孔胶,。分离胶是由ap催化聚合而成的小孔胶, trishcl。 tris甘氨酸缓冲液。种ph值使不连续体系形成了凝胶孔径、ph值、缓冲液离子成分的不连续性,这是样品浓缩的主要因素。

5、SDS-PAGE测定蛋白质的基本原理是什么?简述它的主要步骤?请各位师哥师姐们帮忙解达一下这道考研题

   你必须先了解PAGE,它能有效地把不同类型的蛋白质分开的主要依据,是样品中各种物质的电荷和分子量的差异性。很长的原理。这里就当你了解了。 SDS即十二烷基硫酸钠,是阴离子表面活性剂,它能以一定的比例和蛋白质结合,形成一种SDS一蛋白质复合物。 SDS—PAGE分离蛋白的主要原理,是各种物质分子量的差异性。因为当SDS与蛋白质结合后,蛋白质分子即带有大量的负电荷,并远远超过了其原来的电荷,从而使天然蛋白质分子问的电荷差别就降低乃至消除了。与此同时蛋白质在SDS作用下结构变得松散,形状趋向一致,所以各种SDS一蛋白质复合物在电泳时产生的泳动率差异,就反映了分子量的差异。有公式lgMr=lgKbm=K1bm 步骤:蛋白质样品加入还原剂(2mer or 二硫苏糖醇)和SDS,变性(如煮沸),点样,同时另一泳道加入分子量标准。 高压电泳。染色(如考马斯亮蓝法)。脱色,观察。 只是记忆中,我们做过这个实验,不过是一年前了(仅供参考) 原理:不同蛋白质分子量不同,跑胶的速度就不一样。可以把不同的蛋白质分离开。 步骤: 纯化(?好像还有一步处理,使蛋白质带的静电荷基本相同,不会对跑胶产生影响,具体忘记了)——》制备溶胶——》上样(一般中间的道跑maker蛋白)——》跑胶(以maker蛋白分离开为标准,电压设置,不同蛋白质不同)——》转膜——》荧光染色——》荧光下观察(注意防护) 就记得这些了,希望对你有帮助~ 嘿嘿