1、解释聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理，最好清晰点
聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳是以聚丙烯酰胺凝胶做支持物的一种区带电泳，由于此种凝胶具有分子筛的性质，所以本法对样品的分离作用，不仅决定于样品中各组分所带净电荷的多少，也与分子的大小有关。其次，聚丙烯酰胺凝胶电泳还有一种独特的浓缩效应，即在电泳开始阶段，由于不连续pH 梯度的作用，将样品压缩成一条狭窄区带，从而提高了分离效果。 聚丙烯酰胺凝胶具有网状立体结构，很少带有离子的侧基，惰性好，电泳时，电渗作用小，几乎无吸附作用，对热稳定，呈透明状，易于观察结果。 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂的作用下，聚合交联而成的含有酰胺基侧链的脂肪族大分子化合物。 还要结合聚丙烯酰胺凝胶电泳三个不连续，即：凝胶孔径不同、缓冲液pH不同、缓冲液离子成分不同 和三个效应：浓缩效应、电荷效应、分子筛效应来一起说 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）是蛋白分析中最经常使用的一种方法。它是将蛋白样品同离子型去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS）以及巯基乙醇一起加热，使蛋白变性，多肽链内部的和肽链之间的二硫键被还原，肽链被开。开的肽链靠疏水作用与SDS结合而带负电荷，电泳时在电场作用下，肽链在凝胶中向正极迁移。不同的大小的肽链由于在迁移时受到的阻力不同，在迁移过程中逐渐分开，其相对迁移率与分子量的对数间成线形关系。 年生化考研题目，简答第五题。 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理 聚丙烯酰胺凝胶，是由丙烯酰胺单体（acr）和少量的交联剂n，nˊ甲叉双丙烯酰胺（bis）在催化剂（过硫酸胺或核黄素）和加速剂（n， n，nˊnˊ四甲基乙二胺）的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶。以此凝胶为支持物的电泳称聚丙烯酰胺凝胶电泳（page）。具有机械性能好、化学性能稳定、灵敏度好、分辨率高的优点。page应用十分广泛，可用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、定性、定量和少量制备，还可测定分子量和等电点等。 page根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类。前者电泳体系中缓冲液ph及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场中的泳动主要靠电荷和分子筛效应；后者电泳体系中缓冲液离子成分、ph、凝胶浓度及电…年生化考研题目，简答第五题。 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理 聚丙烯酰胺凝胶，是由丙烯酰胺单体（acr）和少量的交联剂n，nˊ甲叉双丙烯酰胺（bis）在催化剂（过硫酸胺或核黄素）和加速剂（n， n，nˊnˊ四甲基乙二胺）的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶。以此凝胶为支持物的电泳称聚丙烯酰胺凝胶电泳（page）。具有机械性能好、化学性能稳定、灵敏度好、分辨率高的优点。page应用十分广泛，可用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、定性、定量和少量制备，还可测定分子量和等电点等。 page根据其有无浓缩效应，分为连续系统和不连续系统两大类。前者电泳体系中缓冲液ph及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场中的泳动主要靠电荷和分子筛效应；后者电泳体系中缓冲液离子成分、ph、凝胶浓度及电位梯度是不连续的，带电颗粒在电场中的泳动不仅主要靠电荷和分子筛效应，还有浓缩效应。 （）电荷效应 在分离胶中，各种血清蛋白所带静电荷不同，而有不同的迁移率。表面电荷多，则迁移快，反之则慢。因此各种蛋白质按照电荷多少、分子量大小及分子形状以一定顺序排成一个个区带。不连续page所具有的分子筛效应、浓缩效应和电荷效应大大提高了它的分辨率。 电泳后蛋白质染色目前常用的是考马斯亮蓝法，其比氨基黑染色法灵敏度高，可以进行定量扫描，比银染法简便。
2、琼脂糖凝胶电泳的原理什么
琼脂糖凝胶电泳的原理： 琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。 但由于其孔径相比于蛋白质太大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应不足道，现广泛应用于核酸的研究中。 琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。 核酸是两性电解质，，在常规的电泳缓冲液中（），核酸分子带负电荷，在电场中向正极移动。核酸分子在琼脂糖凝胶中泳动时，具有电荷效应和分子筛效应，但主要为分子筛效应。 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中移动，因而迁移得越慢。 电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的电泳迁移率。在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶），电导率最小，DNA几乎不移动；在高离子强度的缓冲液中（如误加×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化或DNA变性。 琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。 蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。 电泳缓冲液的pH在%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。 ，利用脉冲电泳，可分离高达^7bp的?DNA片段。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。 由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动。 扩展资料： 操作琼脂糖凝胶电泳的注意事项： 1、巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。 2、高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。 3、电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。 4、如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象。 mM NaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。 6、太多的DNA上样量可能导致DNA带型模糊，而太小的DNA上样量则导致带信弱甚至缺失。
